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　　将重力法过渡到自动 Flash 色谱法大大提高了进样量，减少了运行时间，并减少了纯化过程中使用的溶剂。

　　在本文中，将重力柱色谱技术与基于分离两种染料的 Pure C-815 Flash 系统的 Flash 法进行了比较。

　　Pure Navigator™ 软件可用于计算优✅化使用不含氯的溶剂梯度解决方案。优化的溶剂系统允许每次运行能纯化更多的样品。

　　重✅力柱㊣色谱，玻璃柱中填充了硅胶和 FC60 支架C-815 ㊣快速色谱系统，由三活塞泵、200nm-800nm 紫外线检测器、DAD、ELSD、封闭式馏分收㊣集器，18x150mm 支架组成

　　用相同质量的硅胶（12g 作为固定相）填充玻璃柱和预填充的色谱柱。将 12g 硅胶和约 60mL 二氯甲烷的浆料混合物填充到玻璃柱中。将硅胶色谱柱以✅ 20mL 二氯甲烷㊣/分钟的流速处理 2 分钟。将染料溶液加载到两个柱中，并开始洗脱程序（详细信息见表1）。使用 Pure Navigator™ 软件计算的己烷/乙酸乙酯进行梯度分离， 3:10 ㊣至 1:2 梯度分离分离 2 分钟，保持 1:2 等度 2 分钟。进行分离实验来确定可以最大分离的，并观察两种染料是否充分分离。

　　。对于使用等压二氯甲烷流动相系统的分离，性能上的差异可以与 Flash 相对于重力柱的效率和流速的提高有关。

　　将流动相改为己烷和乙酸乙酯，采用线性梯度进一步优化了分离效果。在这些实验中，可以根据染料的 Rf 值定制色谱条件，最大限度地提高进样能力和纯✅度。

　　）。切换到梯度㊣模式有助于增加样品的进样量(从 0.5mL 到 1mL)和分离效率（见图3 和 图4）。最好的结果可以通过使用高性能 FlashPure Select 硅胶色谱柱 (实验4

　　图3. 使用 FlashPure EcoFlex 硅胶色谱柱和二氯甲烷流动相进行等度洗脱（实验2）的色谱图

　　图4. 梯度运行的色谱图（实验3）使用 FlashPure EcoFlex 硅胶色谱柱，带有己烷和乙酸✅乙酯㊣梯度流动相

　　图5. 优化方法（实验4）的色谱图，使用 FlashPure Select 硅胶色谱柱，带有己烷和乙酸乙酯梯度流动相

　　的实验参数估㊣算的，使用的是 Fisher Scientific 公布的溶剂目录价格，以及 FlashPure 在发布时的一次性㊣色谱柱的目录价格。假定作业人员的工资为每小时 $22.50，并列入业务费㊣用概算。重力法的启动成本，包括玻璃柱、带底座的垂直支架、馏分收集架和硅胶填料的价格。 Flash 色谱法的启动成本，包括 Pure C-815 和色谱架的成本。所有数据归一化，以显示每 1.0mL 进样量的染料混合物所需的成本和时间。

　　基于以上信息，重力色谱法和 Flash 色谱法的累积成本相等的点大约是 754 次神州细胞待遇怎么样。如果实验室通常每天进行两次重力纯化，并使用 Flash 色谱法切换到每天两次运行，则投资回报率将在 377 个工作日内达到。然而，如果实验室每天进行更多的 5-10 次 Flash 纯化，则盈亏平衡点将在 75 至 150 个工作日之间发生。

　　将开柱法染料纯化过渡到自动化的 Pure C-815 快速色谱系统，可以节省大量的时间和成本，同时还降低了与柱制备相关的操作风险，并提高了所得馏分的纯度。

　　通过使用 Pu㊣re Navigator™ 产生适当的二元溶剂梯度，进一步优化了纯化，同时✅消除了氯化溶剂系统的需要。

　　这种方法提供了更高的进样能力，更高的产品纯度和最佳的效率，同时减少了操作员接触潜在危险㊣的硅胶及氯化溶剂。